У большинства животных, инфицированных вирусом репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS), вырабатываются антитела в период от 7 до 14 дней с начала инфекции; небольшой процент — обычно менее 5% — будет развиваться до 21-го дня.
Эти исходные антитела направлены против N-белка вируса, который является одним из самых антигенных, но эти антитела не имеют прямой связи с защитой, поскольку лишены способности нейтрализации вируса. Большинство коммерческих ELISA используют этот N-белок для диагностики, поскольку он позволяет довольно раннее выявление. С другой стороны, N-белок разделяет эпитопы, общие для вируса типа-1 и типа-2 PRRS, что позволяет ELISA на основе этого белка быть универсальным. Некоторые коммерческие наборы добавили другие антигены (например, GP5) для получения спектра обнаружения. Текущие ELISA не могут различать инфицированных и вакцинированных животных.
Большинство PRRS ELISA основаны на формате, известном как непрямая ELISA, хотя на рынке существуют и другие типы. Косвенная ELISA основана на присоединении антигена вируса к пластинам микротитра, используемым для выполнения теста, и добавлении после этого образца сыворотки, который должен быть протестирован. Реакция обычно выявляется добавлением антитела к IgG свиней, что он связан с ферментом. Когда добавляется подходящий субстрат, если реакция антигена-антитела произошла и фермент присутствует, он будет изменять цвет. В этом типе ELISA интенсивность цвета, которую развивает субстрат, пропорциональна количеству антител, что позволяет полутитровать сыворотку, что она обычно выражается как количество цвета конкретной сыворотки по сравнению с тем, что используется в качестве стандартизированного положительного.
Это то, что называется отношением S/P. Значение S/P конкретной сыворотки варьируется в зависимости от марки используемого набора и, следовательно, сравнение значений не может быть сделано непосредственно. Часто упоминается, что отношение S/P выше у инфицированных животных, чем у вакцинированных. Хотя это в целом верно, его нельзя предполагать в индивидуальном порядке, поскольку существуют полевые штаммы, которые вызывают низкие отношения S/P, но вызывают заболевание. Другими словами, предсказание вирулентности не может быть сделано на основе S/P.
При использовании ELISA в ранее не вакцинированной популяции вируса PRRS, обнаружение сероконверсии отлично и позволяет поставить адекватный диагноз. В этих случаях соотношение S/P обычно высокое и изменение от отрицательного к положительному (здоровому к инфицированному) очень очевидно. Наоборот, у животных, которые уже вакцинируются, эта сероконверсия не столь ясна. На самом деле значительный процент многовакцинированных свиноматок не увеличивал их соотношение S/P после бустерной дозы вакцины. Это может быть связано с различными обстоятельствами.
Одним из объяснений может быть насыщение иммунного ответа, то есть наступает момент, когда не будет вырабатываться более высокий уровень антител независимо от количества применяемых бустерных доз. Другая причина заключается в том, что иммунодоминантные антигены могут меняться по мере развития ответа. Наконец, нельзя исключать, что некоторые животные становятся невосприимчивыми к N-белку, когда они многократно вакцинированы (что не означает, что они теряют защитный иммунитет).
В целом, результаты ELISA должны использоваться только для определения того, было ли животное в контакте с вирусом — вакциной или полевым вирусом — и не для прогнозирования вирулентности штамма, который заразил их, или для определения степени иммунитета животного или стада.
Вы можете задать свой вопрос! Посетите Pig333.com и отправьте свой вопрос нашим экспертам.
«Куэ Миден лас Пруэбас Элиза»?
La mayoría de animales infectados por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRS) desarrollan anticuerpos en un periodo que oscila entre los 7 y los 14 días desde el inicio de la infección; una pequeña minoría — generalmente inferior al 5%- lo hará antes del día 21.
Estos anticuerpos iniciales van dirigidos frente a la proteína N del virus, que es una de las más antigénicas, pero no guardan una relación directa con la protección ya que están de capacidad de neutralización del virus. La mayoría de ELISAs comerciales emplean esta proteína N para el diagnóstico ya que permite una detección relativamente precoz. Por otra parte, la proteína N comparte epítopos que son comunes al virus PRRS de tipo 1 y tipo 2, lo que permite que el ELISA elaborado en base a esta proteína sea universal. En algunos formatos comerciales se pueden añadir otros antígenos (por ejemplo la GP5) con el fin de
En la mayoría de casos, los ELISAs para PRRS para conocido como ELISA indirecto, aunque hay otros formatos en el mercado. El ELISA indirecto se basa en tapizar las placas de plástico en las que se realizará la prueba con el antígeno del virus, añadiendo posteriormente el suero a probar. La reacción se suele revelar al añerpo frente a IgGs porcinas que unido adecuado, éste cambiará de color si se producido la reacción antígeno el enzima está presente. En este tipo de ELISA, la intensidad del color que desarrolla el sustrato es proporcional a la cantidad de anticuerpos, lo que permite un semitita
El valor de S/P de un suero concreto varía en función de la marca comrcial del que se use y, por lo tanto, no pueden hacerse comparaciones de valores directamente. Muchas veces se indica que que la ratio S/P esumirse de forma genérica, no puede asumirse de forma individual ya que cepas de campo queinduced ratios S/P bajas y causan enfermedad. En otras palabras, la predicción de la virulencia no puede hacerse en base a las S/P. Cuando aplicamos el ELISA a una población previamente libre el LISA a una población previamente libre el PRRS y en la que no se estuviese un diagtvo el paso de
Una primera es la saturación de la respuesta inmune, es decir, llega un punto en el que ya no se van a producir niveles de anticuerpos más elevados por muchas dosis de recuerdo que se den. Otra razón está en que los antígenos inmunodominantes pueden cambiar a medida que madura la respuesta. Por último, no puede descartarse que algunos animales se conviertan en poco reactivos frente a la proteína N cuando se vacunan muchas veces (lo que no significa que pierdan inmunidad protectiva).
En resumen, de forma general, los resultados del ELISA sólo deberían usarse para determinar si un animal estuvo en contacto con el virus -vacunal o de campo-y no para predecir la virulencia de la cepa que los infectó o para determinar el grado de inmunidad efectiva de un animal o de un rebaño.
Centre for Research on Animal Health (CReSA), Barcelona University (UAB) — Spain
