Пероральная жидкость

В некоторых странах пероральная жидкость стала широко используемым образцом для обнаружения генома вируса PRRS RT-PCR и антител ELISA. Существуют коммерческие наборы и внутренние анализы для обоих методов. Тем не менее, важно отметить, что из-за физических характеристик пероральной жидкости наборы RT-PCR и ELISA, используемые для анализа сыворотки, не могут быть непосредственно применены к этому типу образца; Анализы должны быть адаптированы.

Основными преимуществами отбора проб пероральной жидкости у животных по сравнению с забором крови являются:

• Естественное поведение свиней облегчает отбор проб.
• Сбор без ограничения животных приводит к значительному снижению стресса.
• Повышение безопасности для людей.
• Сокращение труда/времени.
• Возможность тестирования большого количества особей в агрегированных образцах (полезно для целей мониторинга).

Что касается RT-PCRСыворотка и жидкость для полости рта могут считаться эквивалентными в течение периода виремии. Сыворотка содержит равную или более высокую концентрацию вируса, чем жидкость для полости рта в течение первых двух недель, в то время как она выше в жидкости для полости рта с трех-четырех недель вперед.

В результате, свиньи могут показать отрицательные результаты RT-PCR, в то время как сыворотка положительно влияет на пероральную жидкостьВ этот период выявление вируса в оральной жидкости обычно прерывистое. Еще один важный момент, который следует учитывать, заключается в том, что период выведения ниже и гораздо более прерывистый у вакцинированных свиней. Очевидно, что этот факт имеет прямое значение в диагностике оральной жидкости на вирусоэндемической ферме PRRS, где вакцинируются животные.

По поводу ELISA для сыворотки Они могут считаться специфическими с различной степенью чувствительности, однако в случае пероральных жидкостей, кажется, что ELISA могут иметь проблему специфичности, обнаруживая 5-7% ложных срабатываний.

Условия во время сбора, отгрузки, храненияи т.д. пероральной жидкости может влиять на эффективность лабораторной диагностики:

• Количество канатов (распределение, размер и плотность ручек).
• Материал веревок. Необработанный хлопок рекомендуется.
• Больные животные меньше взаимодействуют или даже не взаимодействуют с веревкой.
• Возраст животных. Сложности при отборе проб молодых животных (3-5 недель).
• Загрязнение кормами или фекалиями.
• Важно отметить, что РНК легко разлагается в биологических жидкостях, поэтому условия отгрузки и хранения имеют решающее значение.
• Экстракция РНК.

шнур для связок

При обязательном отборе проб новорожденных поросят (например, для определения наличия вертикальной передачи) возникает несколько проблем: для получения пероральной жидкости сложныйили даже невозможно, и при недостаточном кровотечении или Плохое качество (коагуляционные) образцы часто получают. Кроме того, кровоточащие мелкие животные являются трудоемкая задача Альтернативой кровоточащим новорожденным поросятам является сбор свежего пуповины.

Преимущества пуповины для определения вертикальной передачи:

• Очень легко собрать. Его могут проводить непосредственно сельскохозяйственные рабочие. Пуповину необходимо зажать и разрезать (рекомендуются порции ≥ 5 см).
• Его можно заморозить.
• Отбор проб не занимает слишком много времени.
• Чувствительность так же высока, как и кровотечение.

Поскольку перекрестное загрязнение может существовать, пуповина должна использоваться для определения состояния помета больше, чем распространенность человека.

Фильтровые бумаги для сухой крови

Часто условия хранения образцов в полевых условиях менее оптимальны, особенно когда РНК-патогены хотят быть проанализированы; для предотвращения деградации РНК образцы должны быть замороженный или охлажденный.

В сухих кровяных фильтрах обрабатываются фильтры, содержащие химические вещества, которые лизуют клетки, денатурируют белки и защищают ДНК и РНК от нуклеаз, окисления и УФ-повреждений. Их можно использовать для сбора, транспортировки и хранения до 125 мкл крови, пероральной жидкости или любой другой интересующей жидкости при температуре окружающей среды. Таким образом, одним из главных преимуществ этого метода является то, что образцы могут быть Посылается в лабораторию по обычной почтеОбразцы могут храниться в течение длительных периодов времени (от месяцев до лет), поскольку нуклеиновые кислоты иммобилизованы и сохраняются в волокнах матрицы.

При сравнении чувствительности и специфичности вируса PRRS в реальном времени RT-PCR, выполняемого непосредственно в свежих образцах или в образцах, встроенных в фильтровальные бумаги с высушенной кровью, создается впечатление, что существуют некоторые проблемы обнаружения вируса во встроенных пероральных жидкостях. Что касается встраиваемой крови, то чувствительность может снизиться из-за низкого количества собранного образца и в тех образцах с низким количеством вируса. Таким образом, свежие образцы со значениями RT-PCR вблизи отсечки (высокий Ct, это означает низкое количество вируса) могут привести к отрицательному результату при переносе образцов в фильтровальную бумагу с высушенной кровью. В результате, похоже, метод может потерять Чувствительность у животных, не инфицированных острым.