Обнаружение антител PRRS

Анализ ферментно-содержащих иммуносорбентов (ELISA)

Тесты ELISA используются для обнаружение сывороточных или пероральных антител к жидкостиВ настоящее время существует множество коммерчески доступных наборов ELISA для обнаружения вирус-специфических антител PRRS; некоторые из них имеют возможность идентифицировать антитела как против PRRSV1, так и против PRRSV2; другие могут различать виды. В последнее время некоторые ELISA также были адаптированы для тестирования образцов жидкости для полости рта.

Сероконверсия (что означает, что тест на антитела становится положительным) указывает на то, что животное было инфицировано вирусом PRRS или, альтернативно, что оно было вакцинировано. Однако индивидуальные ответы являются переменными и на этом уровне могут существовать некоторые проблемы чувствительности и специфичности. Таким образом, при классификации отдельных свиней наблюдались значительные расхождения между различными коммерческими ELISA; эта проблема может быть решена путем тестирования одного и того же образца с более чем двумя тестами. ELISA является одним из наиболее распространенных анализов, используемых для выявления и мониторинга инфекций на стадной основе.Серия образцов из разных возрастов полезна для определения возраста инфекции и продолжительности материнских антител, которые обычно обнаруживаются до 3-8 недель возраста.

Динамика антител против вируса PRRS

Иммуноглобулин М выявляется в течение 7 дней, а Иммуноглобулин G выявляется в течение двух недель. Если анализ ELISA основан на обнаружении антител против N-белка, положительные результаты обычно получают через 14 дней, при этом максимальный пик обычно наблюдается через 5-6 недель после заражения и может быть обнаружен в течение нескольких месяцев. Некоторые свиньи могут стать серонегативными в течение 3-6 месяцев, но другие остаются серопозитивными гораздо дольше, до 1,5 лет; есть сильный идиосинкразический компонент.

Ограничения теста ELISA:

В настоящее время коммерческие ELISA не могут отличить инфицированных от вакцинированных животных.
Элиза не должна использоваться для оценки стадии инфекции.
Антитела, обнаруженные коммерческими ELISA, не коррелируют с защитой.
Высокие уровни антител, обнаруженные ELISA, не обязательно связаны с высокой вирулентностью.
Обычно результаты показаны в виде соотношения (S/P-отношение) между образцом и положительным контролем, предоставленным производителем. Поэтому результат ELISA нельзя рассматривать как «титр».
Величина соотношения S/P не может быть использована для дифференциации антител, полученных из вакцин, от антител, полученных из полевых изолятов.
У ревакцинированного животного или после заражения у ранее инфицированного/привитого животного повышение уровня антител не всегда может наблюдаться.

Монослойный анализ иммунопероксидазы (IPMA) и иммунофлюоресцентный анализ (IFA)

Оба анализа основаны на косвенном окрашивании заранее подготовленных монослоев инфицированных клеток.Коротко засеяны клетки MARC-145 или свиные альвеолярные макрофаги, инфицированные вирусом PRRS в микротитровых пластинах. Позже к тестируемой сыворотке добавляют сыворотку. Если антитела присутствуют в сыворотке, то они будут связываться с антигеном в цитоплазме инфицированных клеток. В случае IPMA связанные антитела обнаруживаются с помощью антивидового конъюгата хреноксидазы и хромогена. Результат считывают с помощью инвертированного микроскопа. IFA аналогично IPMA, но в этом случае связанные антитела обнаруживают с помощью антипорцин-IgG, конъюгированного с флуоресцентным микроскопом. В обоих случаях чувствительность может зависеть от экспертизы лаборатории и от антигенных различий между изолятом, применяемым в тесте, и полевым вирусом, индуцирующим антитела. Используя серийные разведения образца, титр антител можно количественно оценить.

Тест на нейтрализацию вирусов (VNT)

Он обнаруживает антитела, способные нейтрализовать вирус PRRS в клеточных культурах..Нейтрализующие антитела развиваются медленно и не достигают высоких титров. Чувствительность ВНТ сильно зависит от антигенных различий между используемым в тесте изолятом и полевым вирусом, индуцирующим антитела. Это не рутинный диагностический тест. Используя серийные разведения образца, можно измерить титр нейтрализующих антител.

© Laboratorios Hipra, S.A. 2026. Все права защищены. Ни одна часть этого веб-сайта или любое его содержимое не может быть воспроизведена, скопирована, изменена или адаптирована без предварительного письменного согласия HIPRA.

References

Bautista EM, Meulenberg JJ, Choi CS, Molitor TW. Структурные полипептиды американского (VR-2332) штамма вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней. Arch Virol. 1996:1357-65.
Benfield DA, Nelson E, Collins JE, Harris L, Hennings JC, Shaw DP, Goyal SM, McCullough S, Morrison RB, Joo HS, Gorcyca D, Chladek D. Характеристика вируса бесплодия свиней и респираторного синдрома (SIRS) (изолировать ATCC VR-2332). J Vet Diagn Invest. 1992. 4, 127-133.
Benfield D, Nelson J, Rossow K, Nelson C, Steffen M, Rowland R. Диагностика персистирующих или длительных вирусных инфекций, вызванных вирусом репродуктивного и респираторного синдрома свиней Vet Res. 2000, 31:71.
Brockmeier SL, Halbur PG, Thacker EL. Porcine respiratory disease complex. In KA Brogden, JM Guthmiller, eds, Polymicrobial Diseases. Washington, DC: ASM Press. 2002, 231-58.
Calzada-Nova G, Schnitzlein W, Husmann R, Zuckermann FA. Характеристика цитокинов и ответов созревания чистых популяций плазмоцитоидных дендритных клеток свиней на вирусы свиней и агонисты платоподобных рецепторов. Vet Immunol Immunopathol. 2010, 135:20-33.
Чэнь Вай, Шництлэйн ВМ, Кальзада-Нова Г, Цукерман ФАГенотип 2 штаммов вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней дисрегулятор альвеолярного макрофага цитокинов через развернутый белковый ответ. Джей Вирол.2017, pii: JVI.01251-17.
Christopher-Hennings J, Nelson EA, Hines RJ, Nelson JK, Swenson SL, Zimmerman JJ, Chase CL, Yaeger MJ, Benfield DA. Persistence ofporcine reproductive and respiratory syndrome virus in serum and semen of adult boars. J Vet Diagn Invest. 1995, 7:456-64.
Cortey M, Díaz I, Martín-Valls GE, Mateu E. Секвенирование следующего поколения в качестве инструмента для изучения вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRSV) макро- и микромолекулярной эпидемиологии. Vet Microbiol. 2017. doi: 10.1016/j.vetmic.2017.02.002.
Дарвич Л., Диас I. Матеу Е. Определения, сомнения и гипотезы в иммунобиологии вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней. Virus Res. 2010, 154:123-32.
Díaz I, Darwich L, Pappaterra G, Pujols J, Mateu E. Различные вакцины европейского типа против вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней имеют различные иммунологические свойства и обеспечивают различную защиту свиньям. Virology. 2006, 351:249-59.
Диас I, Гимено М, Дарвич Л, Наварро Н, Куземцева Л, Лопес С, Галиндо I, Сегалес Дж, Мартин М, Пужольс Дж, Матеу Е. Характеристика гомологичных и гетерологичных адаптивных иммунных реакций при вирусной инфекции, вызванной репродуктивным и респираторным синдромом свиней. Vet Res. 2012, 19:43:30.
García-Nicolás O, Quereda JJ, Gómez-Laguna J, Salguero FJ, Carrasco L, Ramis G, Pallarés FJ. Цитокины транскрипта уровней в легких и лимфоидных органов во время генотипа 1 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) infection. Vet Immunol Immunopathol. 2014, 160:26-40.
Gimeno M, Darwich L, Diaz I, de la Torre E, Pujols J, Martín M, Inumaru S, Cano E, Domingo M, Montoya M, Mateu E. Cytokine profiles and phenotype regulation of antigen presenting cells by genotype-Iporcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates. Vet Res. 2011, 42:9.
Gómez-Laguna J, Salguero FJ, Pallarés FJ, Carrasco L. Immunopathogenesis of porcine reproductive and respiratory syndrome in the respiratory tract of pigs. Vet J. 2013, 195:148-55.
Haynes JS, Halbur PG, Sirinarumitr T, Paul PS, Meng XJ, Huffman EL. Временная и морфологическая характеристика распространения вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRSV) путем гибридизации in situ у свиней, инфицированных изолятами PRRSV, которые отличаются вирулентностью. Vet Pathol. 1997, 34:39-43.
Хилл Х. Обзор и история загадочной болезни свиней (бесплодие/респираторный синдром свиней). Труды заседания Комитета по тайной болезни свиней, Институт разговоров о животноводстве, Денвер, 1990, 29-31.
Holtkamp DJ, Polson DD, Torremorrell M. Терминология для классификации стад свиней по репродуктивному и респираторному статусу свиней.. 2011, 19:44-56.
Horter DC, Pogranichniy RM, Chang CC, Evans RB, Yoon KJ, Zimmerman JJ. Характеристика состояния носителя при вирусной инфекции, вызванной репродуктивным и респираторным синдромом свиней. Vet Microbiol. 2002, 86:213-28.
Лоула Т. Загадочная свиная болезнь. Агропрактика. 1991, 12:23–34.
Lunney JK, Benfield DA, Rowland RR. Вирус репродуктивного и респираторного синдрома свиней: обновление о возникающем и вновь возникающем вирусном заболевании свиней. Virus Res. 2010, 154:1-6.
Mateu E, Tello M, Coll A, Casal J, Martín M. Сравнение трех ELISA для диагностики репродуктивного и респираторного синдрома свиней. Vet Rec. 2006, 159:717-8.
Матеу Е. Диас I. Проблема иммунологии PRRS. Vet J. 2008, 177:345-51.
Meier WA, Galeota J, Osorio FA, Husmann RJ, Schnitzlein WM, Zuckermann FA. Постепенное развитие интерферон-гамма-реакции свиней на вирусную инфекцию или вакцинацию против репродуктивного и респираторного синдрома свиней. Virology. 2003, 309:18-31.
Nelson EA, Christopher-Hennings J, Benfield DA. Serum immune responses to the proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus. J Vet Diagn Invest. 1994, 6:410-5.
Приложения IV и V к Письму МЭБ АДХО ГРУППЫ ПО ПОРЦИИ РЕПРОДУКТИВНОЙ РЕСПИРАТОРИИ СИНДРОМЕ Париж, 9 — 11 июня 2008 http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Our_scientific_expertise/docs/pdf/PRRS_guide_web_bulletin.pdf.
Rodríguez-Gómez IM, Gómez-Laguna J, Carrasco L. Влияние PRRSV на активацию и жизнеспособность клеток, представляющих антиген. World J Virol. 2013, 2:146-51.
Rovira A, Cano JP, Muñoz-Zanzi C. Осуществимость тестирования объединенных образцов для выявления антител вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней на образцах сыворотки ELISA. Vet Microbiol. 2008, 130:60-8.
Rovira A, Clement T, Christopher-Hennings J, Thompson B, Engle M, Reicks D, Muñoz-Zanzi C. Оценка чувствительности полимеразной цепной реакции обратного транскрипции для обнаружения вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней на отдельных и объединенных образцах кабанов. J Vet Diagn Invest. 2007, 19:502-9.
Rovira A, Reicks D, Muñoz-Zanzi C. Оценка протоколов наблюдения для выявления инфекции вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней в кабанах с помощью имитационного моделирования. J Vet Diagn Invest. 2007, 19:492-501.
Salguero FJ, Frossard JP, Rebel JM, Stadejek T, Morgan SB, Graham SP, Steinbach F. Взаимодействия хозяина с патогеном во время вирусного заражения поросят вирусом 1 репродуктивного и респираторного синдрома свиней. Virus Res. 2015, 202:135-43.
Segalés J, Domingo M, Balasch M, Solano GI, Pijoan C. Ultrastructural study of porcine alveolar macrophages infected in vitro withporcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus, with and without Haemophilus parasuis. J Comp Pathol. 1998, 118:231-43.
Sur JH, Cooper VL, Galeota JA, Hesse RA, Doster AR, Osorio FA. In vivo обнаружение РНК вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней путем гибридизации in situ в разное время после заражения. J Clin Microbiol. 1996, 34:2280-6.
Terpstra C, Wensvoorst G, Pol JMA. Экспериментальное размножение абортов и респираторного синдрома свиней (загадочная болезнь свиней) путем заражения вирусом Лелистада: постулаты Коха выполнены. Vet Q. 1991, 13:131-36.
Тянь К, Юй Х, Чжао Т, Цао Цз, Цяо Цз, Чэнь Х, Чэнь Х, Ху Д, Тянь Х, Лю Д, Чжан С, Дэн Х, Дин Y, Ян Л, Чжан Х, Цяо М, Ван Б, Хоу Л, Ван Х, Кан Л, Сунь М, Цзинь П, Ван С, Китамура Ю, Янь Цз, Гао ГФ. Появление фатальных вариантов PRRSV: непревзойденные вспышки атипичного PRRS в Китае и молекулярное рассечение уникальной отличительной черты. PLoS One. 200, 2:e526.
Tong GZ, Zhou YJ, Hao XF, Tian ZJ, An TQ, Qiu HJ. Высокопатогенный репродуктивный и респираторный синдром свиней, Китай. Emerg Infect Dis. 2007, 13:1434-6. Van Alstine WG, Popielarczyk M, Albregts SR. Влияние фиксации формалина на иммуногистохимическое обнаружение антигена вируса PRRS у экспериментально и естественно инфицированных свиней. J Vet Diagn Invest. 2002, 14:504-7.
Vézina SA, Loemba H, Fournier M, Dea S, Archambault D. Производство антител и бластогенный ответ у свиней, экспериментально инфицированных вирусом репродуктивного и респираторного синдрома свиней. Can J Vet Res. 1996, 60:94-9.
Wensvoort G, Terpstra C, Pol JMA, Lask EA, Bloemraad M, de Kluyver EP, Kragten C, van Butten L, den Besten A, Wagenaar F, Broekhuijsen JM, Moonen PJM, Zetstra T, de Boer EA, Tibben AhJ, de Jong MF, van’r Veld P, Groenland GJR, van Gennep JA, Voets MTh, Verheijden JHM, Braamkamp J. Mystery swine disease in the Netherlands: the isolation of Lelystad virus. Vet Q. 1991, 13:121–30.
Wills RW, Doster AR, Galeota JA, Sur JH, Osorio FA. Длительность инфицирования и доля свиней, постоянно инфицированных вирусом репродуктивного и респираторного синдрома свиней. J Clin Microbiol. 2003, 41:58-62.
Zimmerman JJ, Benfield DA, Dee SA, Murtaugh MP, Stadejek T, Stevenson GW, Torremorell M. Вирус репродуктивного и респираторного синдрома свиней (porcine arterivirus). In: 10th ed. Diseases of swine, Ed. Wiley-Blackwell. 2012, 31:463-86.