7 Detección de anticuerpos

La seroconversión (de negativo a positivo en las pruebas de detección de anticuerpos) indica que un animal ha sido infectado por el virus del PRRS o, alternativamente, que ha sido vacunado.

Sin embargo, las respuestas individuales son variables y podrían existir algunos problemas de sensibilidad y especificidad a este nivel. De hecho, se han observado discrepancias importantes entre diferentes ELISA comerciales al clasificar cerdos individuales. Si esto ocurre, podemos despejar dudas probando la misma muestra con más de dos pruebas.

De todas formas, el ELISA es uno de los ensayos más comúnmente utilizados para detectar y monitorizar infecciones a nivel grupal.

El muestreo seriado de diversas edades es útil para determinar la edad de la infección y la duración de los anticuerpos maternales, los cuales se detectan generalmente hasta las 3-8 semanas de edad.

Dinámica de los anticuerpos contra el virus PRRS

Las IgM se detectan a los 7 días, mientras que las IgG se suelen detectar a partir de las dos semanas.

Si un ensayo ELISA se basa en la detección de anticuerpos generados contra la proteína N, los resultados positivos se obtienen generalmente a los 14 días; entre las 5 y 6 semanas se suele observar un pico máximo y se pueden detectar durante varios meses.

Algunos cerdos pueden seronegativizar en un lapso de 3 a 6 meses, pero otros pueden permanecer positivos durante mucho más tiempo, hasta 1,5 años. En este sentido, hay un fuerte componente idiosincrásico.

Limitaciones:

• En la actualidad, los ELISAs comerciales no pueden distinguir los animales infectados de los vacunados.
• El ELISA tiene limitaciones si queremos estimar la etapa de infección en la que se encuentra el animal.
• Los anticuerpos detectados por ELISAs comerciales no se correlacionan con la protección.
• Un resultado elevado en ELISA no está relacionado necesariamente con una alta virulencia.
• Por lo general, los resultados se muestran como un ratio entre la muestra y un control positivo proporcionado por el fabricante (ratio S/P). Por lo tanto, el resultado del ELISA no puede considerarse como un “título”.
• No se puede utilizar la magnitud del ratio S/P para diferenciar los anticuerpos derivados de la vacuna de los anticuerpos derivados de aislados de campo.
• En un animal revacunado, o después de una infección en un animal previamente infectado/vacunado, no siempre se puede observar un aumento en los niveles de anticuerpos. En otras palabras, no tiene porqué observarse un booster.

Inmunoperoxidasa en monocapa (IPMA) e inmunofluorescencia (IF)

Ambos ensayos se basan en la tinción indirecta de monocapas de células infectadas. Brevemente, las células MARC-145 o los macrófagos alveolares porcinos se siembran en placas de microtitulación y se infectan con el virus del PRRS.

Posteriormente, se añade el suero a analizar. Si hay anticuerpos en el suero, estos se unirán al antígeno que se encuentra en las células infectadas. En el caso de la IPMA, los anticuerpos unidos se detectan mediante conjugado de peroxidasa de rábano picante y un cromógeno.

El resultado se lee utilizando un microscopio invertido. La IF es similar a la IPMA, pero en este caso los anticuerpos unidos se detectan utilizando una IgG anti-porcina conjugada con fluoresceína.

El resultado se lee utilizando un microscopio de fluorescencia.

En ambos casos, la sensibilidad de las técnicas puede depender de la experiencia del laboratorio y de las diferencias antigénicas entre el aislado utilizado en la prueba y el virus de campo que indujo los anticuerpos. Se puede cuantificar el título de anticuerpos de la muestra utilizando diluciones seriadas de la misma.